摘要: 猪德尔塔冠状病毒(Porcine Deltacoronavirus, PDCo V)是一种对哺乳仔猪致病性较强的病原体,感染后可导致急性水样腹泻、呕吐以及高死亡率(30%~50%),对全球养猪业危害严重。为建立一种灵敏且准确的PDCoV检测方法,本研究基于PDCoV N基因的保守序列设计特异性引物和探针,优化反应体系,成功构建了一种TaqMan荧光定量PCR(qPCR)检测方法。以PDCoVN基因重组质粒作为标准品,该方法在8.79×101~8.79×108copies/μL范围内线性关系良好(R2=0.997,斜率=-3.236),最佳引物和探针浓度分别为0.4μmol/L和0.2μmol/L。结果显示,该方法敏感性高,最低检测限为8.79 copies/μL;特异性强,与猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)、伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus, PRV)、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)均无交叉反应;重复性好,组间变异系数和组内变异系数均小于1.5%。本研究建立的qPCR方法可为PDCoV的临床检测和流行病学调查提供可靠的技术支撑。
中图分类号:
S828;S852.65+1
马翮斯,罗灵芝,王元红,虞凌雪,李国新. PDCoV N基因TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立[J]. 中国猪业, 2025, 20(5): 65-72.